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Deep DIA定量蛋白质组学
Deep DIA定量蛋白质组学是基于Astral质谱平台的全新一代direct DIA技术。测序深度高,通过数据非依赖采集扫描模式进行差异定量蛋白质组学分析,可以进行全面的蛋白质组分析,窄窗DIA是一种超快速的定量分析方法。它将四极轨道捕捉质谱仪与Astral质谱仪相结合,可实现高扫描速度、分辨率、灵敏度和低 ppm 质量精度 [1]。这种方法可以每天分析多达 100 个全酵母蛋白组或在短短半小时内分析大约 10,000 个人类蛋白质 [2]。深度与下一代 RNA 测序相当,并且与当前最先进的 MS [3] 相比,通量提高了 10 倍。此外,窄窗DIA具有很高的定量精度和准确性,如在半小时内单次量化14,000多种蛋白质所示 [4]。 图1[1].基于Astral 质谱平台的direct DIA简介技术原理
数据非依赖性的扫描模式(Data-independent acquisition, DIA)是近几年来发展的一种新的质谱数据采集方式[1]。可以依据质荷比(m/z)将质谱整个扫描范围分为若干个窗口,然后对每个窗口中的所有母离子进行碎裂、检测,采集所有母离子的碎片离子信息进行蛋白定性和定量。目前流行的蛋白质组学研究手段,如iTRAQ/TMT、Label-free、SILAC采用的都是数据依赖性的扫描模式(Data-dependent acquisition, DDA),一级质谱进行全扫描采集母离子信号生成一级谱图,二级质谱依次选择一级谱图中信号强度排序为top10/20/40的峰进行碎裂并采集对应的子离子信息。Astral质谱平台
Orbitrap Astral 高分辨质谱仪共包含三个质量分析器:用于选择母离子的四极杆质量分析器、用于采集高动态范围HRAM谱图的 Orbitrap 质量分析器以及能够以高灵敏度和高达200Hz的速度采集高动态范围HRAM谱图的全新 Astral 质量分析器。这些质量分析器的独特优势相结合,最大限度提升了解决方案的性能和可用性 图2. Astral 质谱仪简介技术优势
相对于DDA,DIA优势体现在:技术路线
分析流程
参考文献
[1].Ulises, H, Guzmán., Ana, Martinez, Del, Val., Zilu, Ye., Eugen, Damoc., Tabiwang, N., Arrey., Anna, Pashkova., Eduard, Denisov., Ole, Østergaard., Hamish, Stewart., Yue, Xuan., Alexander, Makarov., Vlad, Zabrouskov., Jesper, V., Olsen. Narrow-window DIA: Ultra-fast quantitative analysis of comprehensive proteomes with high sequencing depth. bioRxiv, (2023).Copyright@2011-2023 All Rights Reserved 版权所有:九游j9登陆 京ICP备15007085号-1
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